Farklı genomik dna izolasyon yöntemlerinin satureja (labiatae) türlerinde uygulanması

Abstract

Bitkilerden genomik DNA izolasyonu için farklı protokoller bulunmaktadır. Ancak farklı bitkilerin kimyasal içerikleri de farklı olduğundan birbirine yakın türler için bile özel genomik DNA izolasyon yöntemi gerekli olabilmektedir. Bu çalışmada tıbbi ve aromatik bitkilerden, uçucu yağ ve fenolik bileşiklerce zengin Satureja (Labiatae) cinsi kullanılmıştır. Bu çalışmada üç farklı DNA izolasyon yöntemi uygulanmıştır. Bu yöntemler karşılaştırıldığında bazı değişiklikler yapılarak oluşturulan yöntemin en uygun yöntem olduğuna karar verilmiştir. Bu yöntemle elde edilen gDNA’ da, proteinler, RNA, polisakkaritler, uçucu yağlar, fenoller ve diğer kirleticiler minimal düzeydedir. Bu elde edilen DNA’ların saflığı ve miktarı jel elektroforezi ve UV (A260 /A280 ve A260 / A230) spektroskopik ölçümlerle belirlenmiştir. Ayrıca Rasgele Arttırılmış Polimorfik DNA (RAPD) tekniğiyle DNA’nın PZR tekniklerine uygunluğu gösterilmiştir.

There are several methods available for isolation of genomic DNA for plants. However, since different plants have different chemical composition, even close species need specific genomic DNA isolation protocol. In this study, Satureja (Labiatae) genus that is very rich in essential oils and phenolic compounds and one of the aromatic plants has been used. Two different DNA isolation procedures have been tried. A modified procedure was developed after a comparison of two different procedures. Main contaminants for genomic DNA, RNA, polysaccharides, essential oils, phenolic compounds were at minimal level in the genomic DNA. The concentration and purity of the obtained DNA was determined by agarose gel electrophoresis and UV spectroscopy (A260/A280 and A260/230). In addition, the suitability of genomic DNA obtained from different procedure were also checked by RAPD-PCR reactions.