Rutin mikrobiyoloji laboratuvarlarında bulunan temel besiyerlerinde trichomonas vaginalis’in üretilmesi

Abstract

Amaç: Trichomonas vaginalis, tek hücreli ve kamçılı bir parazit olup, cinsel yolla bulaşan etkenler arasında virüslerden sonra en sık görülen ikinci patojendir. T. vaginalis’in laboratuvar tanısı, mikroskobik inceleme, kültür ve moleküler yöntemler ile yapılmaktadır. Ancak rutin mikrobiyoloji laboratuvarlarının çoğunda kültür ve moleküler yöntemlerin maliyetli olması nedeniyle sadece mikroskopi ile tanı konulmaya çalışılmaktadır. Bu çalışmada, mikrobiyoloji laboratuvarında yaygın olarak bulunan besiyerlerinde T. vaginalis’in üretilmesi amaçlanmıştır. Yöntemler: Bu çalışmada, tiyoglukolat besiyeri (THIO), brain heart infusion besiyeri (BHI), tryptic soya broth besiyeri (TSB) ve Brucella broth besiyeri (BRB) olmak üzere dört besiyeri modifiye edilerek denenmiştir. Referans besiyeri olarak trypticase yeast-extract-maltose (TYM) besiyeri kullanılmıştır. Denenen her bir besiyeri, üç farklı serum katkısı ile zenginleştirilmiştir. Her bir besiyerine 104 parazit/mL T. vaginalis trofozoiti inoküle edilmiş ve 37 °C’de 10 gün inkübe edilmiştir. Trofozoit sayısı hemasitometre, canlılık oranları ise tripan mavisi kullanılarak belirlenmiştir. Bulgular: Besiyerlerindeki T. vaginalis üremesi, referans besiyeri olan TYM ile kıyaslanmıştır. T. vaginalis, at serumu ve fetal sığır serumu ile zenginleştirilmiş THIO, BHI ve TSB besiyerlerinde çok iyi ürerken, BRB besiyerinde ürememiştir. Buna ek olarak, insan serumu ile zenginleştirilmiş besiyerlerinin hiçbirinde T. vaginalis üremesi görülmemiştir. Parazitin en yüksek seviyeye ulaştığı zaman ve sayı, THIO-ATS ve THIO-FCS besiyerleri için sırasıyla, beşinci ve dördüncü günde 100x104 parazit/mL; BHI-ATS besiyeri için üçüncü günde 100x104 parazit/mL; BHI-FCS besiyeri için beşinci günde 98x104 parazit/mL; TSB-ATS besiyeri için dördüncü günde 100x104 parazit/mL ve TSB-FCS besiyeri için ise yedinci günde 82x104 parazit/mL olarak belirlenmiştir. Referans besyeri olan TYM ile kıyaslandığında T. vaginalis trofozoitlerinin yaşam süresinin THIO, BHI ve TSB besiyerlerinde çok daha uzun olduğu saptanmıştır. Sonuç: THIO-ATS, THIO-FCS, TSB-ATS, TSB-FCS, BHI-ATS ve BHI-FCS besiyerlerinin, T. vaginalis’in üretilebilmesi açısından TYM ile kıyaslanabilir olduğu saptanmıştır. Rutin mikrobiyoloji laboratuvarında yaygın olarak bulunan THIO, TSB ve BHI besiyerlerinin zengin içeriği T. vaginalis’in kültürüne imkan sağlayabilir.

Objective: Trichomonas vaginalis is a protozoan parasite with unicellular, flagellate, and anaerobic metabolism. It is the second most prevalent pathogen among sexually transmitted agents after viruses. Microscopic examination, culture, and molecular methods are used in the laboratory diagnosis of T. vaginalis. However, in most routine microbiology laboratories, microscopy is preferred instead of culture and molecular methods for T. vaginalis diagnosis because microscopy is cheaper than other methods. This study aimed to produce T. vaginalis in media that can be detected frequently in microbiology laboratories. Methods: In this study, four media, namely, thioglucholate medium (THIO), brain heart infusion medium (BHI), tryptic soy broth medium (TSB), and Brucella broth medium (BRB) were modified and tested. Trypticase-yeast extract-maltose (TYM) medium was used as a reference medium. Each medium tested was enriched with three different serum additives. T. vaginalis trophozoite at a density of 104 parasites/mL was inoculated into each medium and incubated at 37 °C for 10 days. We determined the number of trophozoites using a hemocytometer, and the viability rates were determined using trypan blue. Results: Trichomonas vaginalis grew extremely well on THIO, BHI, and TSB media but not on BRB media. The time and number of parasites peaked were determined as 100×104 parasites/mL on THIO-ATS and THIO-FCS media on days five and four, respectively, 100×104 parasites/mL on BHI-ATS on day three, 98×104 parasite/mL on BHI-FCS media on day five, 100×104 parasites/mL on TSB-ATS on day four, and 82×104 parasite/mL on TSB-FCS media on day seven. Compared with the reference medium, TYM, T. vaginalis trophozoites survived significantly longer in THIO, BHI, and TSB media. Conclusion: The rich content of THIO, TSB, and BHI media, which are widely available in routine microbiology laboratories, may allow T. vaginalis growth.