İnsan eritrositlerinden glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimin saflaştırılması ve bazı pestisitlerin enzim üzerindeki etkilerinin araştırılması

Abstract

Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (D-glukoz-fosfat:NADP* oksidoreduktaz, EC 1.1.1.49; G6PD) insan eritrositlerinden saflaştırıldı. Saflaştırma işlemi, hemolizatın veya homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2' ,5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi olarak üç basamaktan oluştu. Eritrosit G6PD enzimleri %14,68 verimle, spesifik aktiviteleri 120,13 U/mg olarak elde edildi. Tüm saflaştırma işlemleri sonunda insan eritrosit G6PD enzimi 2742,69 kat saflaştırıldı. SDS poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile enzimin saflığı belirlendi. Enzim aktiviteleri spektro fotometrik olarak 840nm'de Beutler metoduna göre ölçüldü. Ayrıca insan eritrosit G6PD enziminin aktivitesi üzerine bazı pestisitlerin in vitro etkileri araştırıldı.In this study, glucose-6-phosphate dehydrogenase (D-glocose-6phosphate:NADP oxidoreductase, EC 1.1.1.49;G6PD) was purified from human erythrocytes. The purification consisted of three steps; preparation of haemolysate or homogenate, ammonium sulphate fractionation and 2,5'-ADP Sepharose 4B affinity chromatography. Erytrocytes G6PD enzyme was obtained with a yield of %14,68 having a specific activity of 120,13 U/mg proteins respectively. The overall purification was abaut 2742,69-fold for erythrocytes G6PD. The purification enzyme was determined respectively by SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE), Enzymatic activity was spectrofotometrically measured according to Beutler method at 340nm. In addition, in vitro effects of pesticides on human red blood cell G6PD enzyme activity was investigated.