Ölçülü doz inhalasyonu ürünlerinde sızabilen safsızlık olarak yağ asitlerinin yüklü aerosol dedektörlü yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile belirlenmesi.

Abstract

Leachable çalışması için genel bir metot bulunmamakta olup, bu tez çalışması ile ilaç endüstrisinde ölçülü doz inhalasyonu olan bir ilaçta safsızlık olabilecek yağ asitleri analizi için yeni bir HPLC/CAD yöntemi geliştirilmesi ve geliştirilen bu metodun valide edilmesi amaçlanmaktadır. Bu çalışmada ürünün valf kısmından sızabilecek yağ asitlerininin (miristik asit, linoleik asit, palmitik asit, oleik asit, elaidik asit, stearik asit, arakidik asit) leachable çalışmaları HPLC/CAD sisteminde yapılmış olup metot geliştirme aşamasında metot parametrelerinde, cihaz ve dedektör parametrelerinde değişimler yapılarak validasyona başlanacak tüm parametreler belirlenmiştir. Geliştirilen metodun validasyonunda; seçicilik (spesifiklik), doğrusallık (linearite) ve çalışma aralığı, LOD (Tespit Limiti) ve LOQ (Tayin Alt Limiti), doğruluk (geri kazanım), kesinlik (tekrarlanabilirlik-ara kesinlik), sağlamlık, stabilite parametreleri uygulanmıştır. Geliştirilen analitik metotla kromatografik ayrımda sabit faz olarak C18 kolon, hareketli faz olarak ise mobil faz A (1000.0 mL saf su içerisine 0.5 mL formik asit) ve mobil faz B (1000.0 mL asetonitril içerisine 0.5 mL formik asit)’ den oluşan gradient sistem kullanılmıştır. Validasyonda ise seçicilik parametresi ile metodun seçiciliği doğrulanmıştır, LOD ve LOQ değerleri belirlenmiştir; doğrusallık parametresiyle LOQ ile % 150 konsantrasyonları arasında sonuçların doğrusal olduğu gösterilmiştir; doğruluk parametresiyle geri kazanım elde edilmiştir; kesinlik parametresiyle tekrarlanabilir sonuçlar elde edilmiştir. Laboratvar içi kesinlik çalışmasıyla başka bir analist tarafından analiz tekrarlandığında benzer sonuçlar bulunmuştur. Sağlamlık parametresiyle formik asit miktarı 0.5 mL/L ± % 5 ve kolon sıcaklığı 50°C ± 2°C ayarlandığında sistem uygunluk şartları sağlanmıştır. Stabilite parametresi 10°C’ de standart çözeltisi 48 saat; numune çözeltisi için 3 saat belirlenmiştir. Sonuç olarak bu çalışmayla leachable olan yağ asitlerinin analizi için valide edilmiş bir metot elde edilmiştir.

There is no universal method for leachable studies, and this thesis aims to develop a new HPLC/CAD method for the analysis of fatty acids, which could be potential impurities in a metered-dose inhalation drug in the pharmaceutical industry, and to validate the developed method. In this study, the leachable analysis of fatty acids (myristic acid, linoleic acid, palmitic acid, oleic acid, elaidic acid, stearic acid, arachidic acid) that might leak from the valve part of the product was carried out using an HPLC/CAD system. During the method development phase, changes were made to method parameters, device and detector settings to determine all parameters required for validation. For the validation of the developed method, the following parameters were applied: selectivity (specificity), linearity and working range, LOD (limit of detection) and LOQ (limit of quantitation), accuracy (recovery), precision (repeatability-intermediate precision), robustness, and stability. For the chromatographic separation with the developed analytical method, a C18 column was used as the stationary phase, and a gradient system consisting of mobile phase A (0.5 mL formic acid in 1000.0 mL of purified water) and mobile phase B (0.5 mL formic acid in 1000.0 mL of acetonitrile) was used as the mobile phase. During validation, the selectivity parameter confirmed the method’ s specificity, LOD and LOQ values were determined, and the linearity parameter demonstrated that the results were linear between LOQ and 150% concentrations. The accuracy parameter achieved recovery results, and the precision parameter ensured repeatable results. An intra-laboratory precision study showed that similar results were obtained when another analyst performed the analysis. With the robustness parameter, the system suitability conditions were met when the formic acid amount was adjusted to 0.5 mL/L ± 5% and the column temperature to 50°C ± 2°C. The stability parameter results showed that the standard solution was stable for 48 hours at 10°C, and the sample solution was stable for 3 hours at 10°C. In conclusion, a validated method was obtained for the analysis of leachable fatty acids through this study.