Potansiyel p90 ribozomal s6 kinaz (rsk) inhibitörlerinin kolon kanseri hücre modelinde antikanser etkinliklerinin belirlenmesi

Abstract

RSK proteini hücre içerisinde çeşitli rollerde görevli olan bir proteindir. Metastaz, proliferasyon ve hücre büyümesi ve gelişmesi gibi kritik yolaklarda işlevi olan bu proteinin çeşitli çalışmalar sonucunda kanser hücrelerinde normale kıyasla daha fazla ifade olduğu vurgulanmıştır. Bu tez kapsamında, in siliko analizler ile belirlenen ve ticari potansiyel RSK inhibitörlerinin kolorektal kanseri hücreleri ve sağlıklı model olan HUVEC hücreleri üzerine in vitro etkilerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, temin edilen ticari potansiyel inhibitör adaylarının ilk olarak total RSK seviyeleri SW480 ve HT-29 hücre hatlarında western blotting metodu ile protein seviyesinde gösterilmiştir. Ticari potansiyel RSK inhibitörlerinin sitotoksik özelikleri SW480 ve HT-29 hücrelerinde MTT analizi ile belirlenmiştir ve IC50 değerleri hesaplanmıştır. Buna göre Y040-4759, S322-0083 ve C592-3214 kodlu bileşikler, özellikle SW480 ve HT-29 hücre hatlarında düşük IC50 değerleriyle öne çıkmıştır. Annexin V/PI testi ve western Blotting testi uygulanarak apoptoz tespit edilmiştir. HT-29 hücreleri için Y040-4759, 6190-0389, V030-2239, S322-0083, C592-3214 ve V031-1748 bileşikleri etkili olurken, SW480 hücrelerinde F688-0005, Y040-4759, S322-0083 bileşikleri etkili olmuştur. Koloni formasyon ve yaralanma deneyi analizleri yapılarak hücrelerin koloni oluşturabilme ve göç potansiyelleri incelenmiştir. Bunun sonucunda HT-29 hücre hattı için F688-0005, C592-3214, V031-1748, V030-2239 ve Y040-3184 bileşiklerinin ve SW480 için ise F688-0005, C592-3214 ve S322-0083 bileşiklerinin yara iyileşme potansiyelini azaltıcı etkileri ön plana çıkmıştır. Koloni oluşturma yetilerine bakıldığında SW480 için F688-0005 ve Y040-4759 bileşiklerinin koloni oluşumunu baskıladığı, HT-29 hücreleri için ise F688- 0005, C592-3214, V031-1748, V030-2239, 6190-0389 ve Y040-3184 bileşiklerinin koloni oluşturma kabiliyetini azaltmıştır. Protein seviyesinde ki sonuçlarına göre ise SW480 hücre hattında Y040-4759 ve HT-29 hücre hattında F688-0005 ve C592-3214 bileşiklerinin, total ve fosforile RSK düzeylerini düşürdüğü görülmüştür. Sonuç olarak, özellikle F688-0005 ve C592-3214’ün RSK inhibisyonu yoluyla kolon kanseri hücrelerinde potansiyel antikanser bileşikler olma yolunda umut vaat etmektedir.RSK is a multifunctional protein that plays critical roles in various cellular pathways, including metastasis, proliferation, and cell growth and development. Numerous studies have highlighted that RSK is expressed at higher levels in cancer cells compared to normal cells. In this thesis, the aim was to investigate the in vitro effects of commercially available potential RSK inhibitors, identified via in silico analyses, on colorectal cancer cell lines and a healthy control cell line (HUVEC). Initially, the total RSK expression levels in SW480 and HT-29 cell lines were demonstrated at the protein level using the western blotting technique. The cytotoxic properties of the selected commercial RSK inhibitor candidates were determined through MTT assays on SW480 and HT-29 cells, and their IC₅₀ values were calculated. Based on these results, compounds Y040-4759, S322-0083, and C592-3214 were particularly notable for their low IC₅₀ values in both cell lines. Apoptosis was evaluated using both Annexin V/PI assay and western blotting. For HT-29 cells, compounds Y040-4759, 6190-0389, V030-2239, S322-0083, C592-3214, and V031- 1748 were effective in inducing apoptosis, while F688-0005, Y040-4759, and S322-0083 were effective in SW480 cells. Colony formation and wound healing (scratch) assays were performed to assess the colony-forming ability and migratory potential of the cells. Accordingly, F688-0005, C592-3214, V031-1748, V030-2239, and Y040-3184 inhibited wound healing in HT-29 cells, while F688-0005, C592-3214, and S322-0083 showed similar effects in SW480 cells. Regarding colony formation, F688-0005 and Y040-4759 significantly reduced colony formation in SW480 cells, whereas F688-0005, C592-3214, V031-1748, V030-2239, 6190-0389, and Y040-3184 suppressed colony formation in HT-29 cells. At the protein level, compound Y040-4759 was found to reduce total and phosphorylated RSK levels in SW480 cells, while F688-0005 and C592-3214 decreased these levels in HT- 29 cells. In conclusion, especially F688-0005 and C592-3214 show promising potential as anticancer agents targeting RSK inhibition in colorectal cancer cells.