Scyliorhinus canicula (Linnaeus, 1758) paraoksonaz enziminin saflaştırılması, kinetik ve elektroforetik özelliklerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, detoksifikasyon ve antioksidan aktivitesi ile metabolizmada önemli fizyolojik fonksiyona sahip paraoksonaz (PON) enzimi Scyliorhinus canicula (LİNNAEUS, 1758) serumundan saflaştırılıp, kinetik ve elektroforetik özellikleri araştırılmıştır. Bu amaçla Sepharose-4B-L-tirozin-1-naftilamin kimyasal yapısına sahip jel kullanılmıştır. Amonyum sülfat çöktürmesi ve hidrofobik etkileşim kromatografisi yöntemleri kullanılarak S. canicula serumundan PON enzimi saflaştırılmıştır. Saflaştırılan PON enzimi SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulanarak yaklaşık 66 kDa molekül ağırlığına sahip tek bant elde edilmiştir. S. canicula serum PON enziminin paraokson substratına karşı KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk yöntemi ile sırasıyla 0.227 mM ve 454.545 U/mLdak olarak bulunmuştur. Saflaştırılan PON enzimi üzerine in vitro inhibisyon etkisi gösteren Ni+2, Cd+2, Cu+2 ve Hg+2 metal iyonları için IC50 değerleri belirlenmiştir.In this study, paraoxonase (PON), which has an important physicological function in metabolism with detoxification and antioxidant activity was purified from Scyliorhinus canicula( LİNNAEUS, 1758) and investigated its kinetic and electrophoretic properties. For this aim the gel which has Sepharose-4B-L-tyrosine-1-napthylamine in chemical structure, is used. S. canicula blood serum paraoxonase was purified with ammonium sulfate presipitation and hydrophobic interaction chromatography. On SDS-polyacrilamide gel electrophoresis, purified S. canicula blood serum paraoxonase to give a single band on SDS-PAGE with about weight of 66 kDa. The KM and Vmax values were determined by the method of Lineweaver-Burk plots, using paraoxon as a substrate. The KM and Vmax is 0.227 mM and 454.545 U/mL respectively. In vitro inhibitory effects of some metal ions, incorporting Ni+2, Cd+2, Cu+2 and Hg+2 were evaluated. IC50 values of metal ions were calculated.