Immunofluorescent imaging of kisspeptin in some brain regions in different stages of sexual cycles of female mice

Abstract

Objective: The aim of the study was to determine kisspeptin intensity by immunofluorescence method in hypothalamus arcuate nucleus (ARC), paraventricular nucleus (PVN), dorsomedial nucleus (DMN) and ventromedial nucleus (VMN) in the diestrus, proestrus and estrus phases of the sexual stages of female mice. Material and Method: In the study, 40 female Balb/c mice aged 5-6 months with an average weight of 35-40 grams were used. All female mice were cycled by vaginal smear with an average of 3 oestrus cycles. Total of 21 animals with regular cycles were selected and divided into 3 groups according to estrus phases (diestrus, proestrus, estrus and groups, n =7). Animals were decapitated without administering any anesthetic and then brain tissues were frozen on dry ice. Sections were taken from the brain tissue and fluorescent staining steps were applied. At the end of the study, kisspeptin density in ARC, PVN, DMN and VMN nuclei of the hypothalamus was calculated by immunofluorescence method. Results: It was found that the intensity of kisspeptin higher significantly in the oestrus group compared to the diestrus group in ARC, DMN and VMN. When the intensity of kisspeptin in the PVN was statistically evaluated, insignificant difference was found among the groups. In the DMN and VMN regions, when the estrus and proestrus groups were compared to the diestrus group, the intensity of kisspeptin higher significantly. Conclusion: It was determined that kisspeptin intensity was different in hypothalamic ARC, DMN, VMN and PVN regions at estrous, diestrus and proestrus stages of female miceAmaç: Bu çalışma ile dişi farelerin cinsel dönemlerinin östrus, diöstrus ve proöstrus fazlarında hipotalamusun arkuat nükleus (ARC), paraventriküler nükleus (PVN), dorsomedial nükleus (DMN) ve ventromedial nükleus (VMN) bölgelerinde kisspeptin ekspresyonunun immünofloresan yöntemi ile belirlenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmada, 40 adet ortalama ağırlığı 35-40 gram olan 5-6 aylık Balb/c ırkı dişi fare kullanılmıştır. Tüm dişi farelere, ortalama 3 östrus döngüsü olacak şekilde vajinal smear ile siklus takibi yapılmıştır. Düzenli siklus gösteren toplam 21 adet hayvan seçilmiş ve östrus fazlarına göre 3 gruba ayrılmıştır (diöstrus proöstrus, östrus ve grupları olmak üzere, n =7). Hayvanlara, herhangi bir anestezik madde uygulamadan dekapite edilmiştir ve ardından beyin dokuları kuru buzda dondurulmuştur. Çalışmanın sonunda, hipotalamusun ARC, PVN, DMN ve VMN çekirdeklerinde kisspeptin yoğunluğu immunofloresan yöntemle hesaplanmıştır. Bulgular: ARC’de östrus grubunun diöstrus grubuna göre kisspeptin yoğunluğunun istatistiksel olarak anlamlı derecede arttığı bulunmuştur. PVN’de kisspeptin yoğunluğu, istatistiksel olarak değerlendirildiğinde gruplara göre anlamlı bir farklılık bulunmamıştır. DMN ve VMN bölgelerinde, östrus ve proöstrus grupları diöstrus grubuyla kıyaslandığında kisspeptin yoğunluğunun istatistiksel olarak anlamlı derecede arttığı bulunmuştur. Sonuç: Dişi farelerin östrus, diöstrus ve proöstrus dönemlerinde hipotalamik ARC, PVN, DMN ve VMN bölgelerinde kisspeptin yoğunluğunun farklı olduğu tespit edilmiştir