Il-6 sitokininin adamts-14 genine etkisinin belirlenmesi

Abstract

ADAMTS (Trombospondin Motifli A Disintegrin ve Metalloproteinaz) gen ailesi, hücre dışı matriksin yeniden düzenlenmesi, doku gelişimi ve inflamasyonla ilişkili patolojik süreçlerde rol alan çinko bağımlı metalloproteinazlardan oluşmaktadır. Bu aile üyelerinden biri olan ADAMTS-14, prokolajen N-proteinaz aktivitesi aracılığıyla kollajen olgunlaşması ve ekstraselüler matriks organizasyonunda görev almaktadır. ADAMTS-14’ün farklı kanser türlerinde bağlama ve doku tipine bağlı olarak değişen roller gösterebildiği bildirilmiş olsa da, inflamatuvar sitokinler tarafından nasıl düzenlendiğine ilişkin moleküler mekanizmalar yeterince açıklığa kavuşmamıştır. Bu tez çalışmasında, pro-inflamatuar bir sitokin olan interlökin-6’nın (IL-6), ADAMTS-14 geninin ekspresyonu üzerindeki etkileri kolorektal kanser hücre modeli olarak kullanılan SW480 hücrelerinde incelenmiştir. ADAMTS-14 genine ait farklı promotor bölgeleri hücrelere geçici olarak transfekte edilmiş ve bazal ile IL-6 uyarımı sonrası transkripsiyonel aktiviteler luciferaz raporlayıcı gen analizleri ile değerlendirilmiştir. IL-6 ve yolak inhibitörlerinin ADAMTS-14 geninin mRNA düzeyleri üzerindeki etkileri kantitatif gerçek zamanlı PCR yöntemi ile analiz edilmiş; protein ekspresyonundaki değişimler Western blot yöntemi ile belirlenmiştir. Ayrıca, ADAMTS-14 proteininin hücresel lokalizasyonu immünfloresan sitokimya yöntemi ile incelenmiştir. Elde edilen bulgular, IL-6 uygulamasının ADAMTS-14 geninin transkripsiyonel aktivitesini artırdığını ve bu etkinin mRNA ve protein düzeylerine yansıdığını göstermiştir. İnhibitör çalışmaları, bu düzenlemenin birden fazla hücre içi sinyal yolunun katkısıyla gerçekleştiğini ortaya koymuştur. Sonuç olarak, bu çalışma IL-6 aracılı inflamatuvar sinyalizasyonun ADAMTS-14 geninin çok düzeyli regülasyonunda önemli bir rol oynadığını göstermekte ve ADAMTS-14’ün kolorektal kanserde potansiyel bir biyobelirteç veya terapötik hedef olabileceğine işaret etmektedir.

The ADAMTS (A Disintegrin and Metalloproteinase with Thrombospondin Motifs) gene family consists of zinc-dependent metalloproteinases involved in extracellular matrix remodeling, tissue development, and inflammatory pathological processes. As a member of this family, ADAMTS-14 functions in collagen maturation and extracellular matrix organization through its procollagen N-proteinase activity. Although ADAMTS-14 has been reported to exhibit context-dependent and tissue-specific roles in various cancer types, the molecular mechanisms underlying its regulation by inflammatory cytokines remain poorly understood. In this thesis, the effects of interleukin-6 (IL-6), a pro-inflammatory cytokine, on the expression of the ADAMTS-14 gene were investigated in SW480 cells used as a colorectal cancer cell model. Different promoter regions of the ADAMTS-14 gene were transiently transfected into cells, and transcriptional activities under basal conditions and following IL-6 stimulation were evaluated using luciferase reporter gene assays. The effects of IL-6 and its pathway inhibitors on the mRNA levels of the ADAMTS-14 gene were analyzed by quantitative real-time PCR (qRT-PCR), and changes in protein expression were determined by Western blot analysis. Furthermore, the cellular localization of the ADAMTS-14 protein was examined using immunofluorescence cytochemistry. Our findings demonstrated that IL-6 treatment increased the transcriptional activity of the ADAMTS-14 gene, which was subsequently reflected at both mRNA and protein levels. Inhibitor studies revealed that this regulation occurs through the contribution of multiple intracellular signaling pathways. In conclusion, this study indicates that IL-6-mediated inflammatory signaling plays a crucial role in the multi-level regulation of the ADAMTS-14 gene and suggests that ADAMTS-14 could serve as a potential biomarker or therapeutic target in colorectal cancer.