Değişik balık türlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimi üzerine bazı pestisitlerin etkilerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmanın birinci bölümünde beş farklı tür balık(Cyprinus carpio, Barbus barbus, Salmo gairdnerü, Diplodus vulgaris ve Scorpaena porcus ) eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimi üzerine bazı pestisitlerin inhibisyon etkileri araştırılmıştır. Bu pestisitler Rubigan [2,4'-dikloro-α-(pirimidin- 5-yl) benzhidril alkol], Metidol [O,O-dimetil O-4-nitrofenil fosfortioat ], Super amin'a [(2,4-diklorfenoksi) asetik asit dimetil amonyum] ve Trimidal [2-kloro- 4'-fluoro-α-(pirimidin-5-yl) benzhidril alkol] bileşikleridir. Etkisi araştırılan bu pestisitlerin tümü, sözkonusu balık eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimleri üzerinde değişik düzeylerde inhibisyona neden olduğu bulunmuştur. I50 değerleri 0,18-3,19 mM aralığındadır. Scorpaena porcus eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enziminin kullanılan bu pestisitlere karşı duyarlı olduğu bulunurken, daha kirli sularda yaşayan Cyprinus carpio ve Barbus barbus eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimlerinin ise söz konusu pestisitlere karşı daha dirençli olduğu saptanmıştır. Araştırmamızın ikinci bölümünde ise, afinite jeli (Sepharose-4B-L-tirozin-p- aminobenzensülfonamid) kullanarak Cyprirms carpio eritrositlerinden karbonik anhidraz enzimi saflaştırıldı. Saflaştırma derecesi 314 kat olarak tespit edildi. SDS- PAGE uygulanarak saf enzim tek bir bant olarak gözlendi. Km ve Vmax değerleri sırasıyla 1,49 mM ve 8,62 U/mL.min olarak bulundu.The inhibition effects of some pesticides were investigated on carbonic anhydrase which obtained from five different fish species (Cyprinus carpio, Barbus barbus, Salmo gairdnerii, Diplodus vulgaris and Scorpaena porcus). These pesticides were Rubigan [2,4'-dicloro-α-(pyrimidin-5-yl) benzhydryl alcohol], Metidol [O,O-dimethyl O-4-nitro phenyl phosphorothioate], Super amin'a [2,4- dichlorphenoxy) acetic acid dimethyl ammonium] and Trimidal [2-chloro-4'-fluoro- a-(pyrimidin-5-yl) benzhydryl alcohol]. The carbonic anhydrase was inhibited by all the pesticides in different levels. The I50 values were between 0.18-3. 19 mM range. The enzyme which was isolated from Scorpaena porcus fish was more sensitive than the other fish species. The carbonic anhydrase enzymes which were obtained from Cyprinus carpio and Barbus barbus that living in dirty water, were more resistant than the others. In the second stage of this study, carbonic anhydrase enzyme has been purified from erythrocytes of Cyprinus carpio using an affinity gel (Sepharose 4B- L-tyrosine p-aminobenzensulfonamide). The purification level was 314 fold. The meluates were separated through a SDS polyacrylamide gel electrophoresis and the pure enzyme was observed as a single band. The Km and Vmax values of Cyprimis carpio carbonic anhydrase were calculated as 1.49 mM and 8.6 U/ml.min for p-nitrophenlyacetate, respectively.