ADAMTS2 geninin klonlanması ve ekspresyonu

Abstract

ADAMTS’ler (A Disintegrin and Metalloproteaz With Trombospondin Motifs; Trombospondin Motifli Matriks Metalloproteazlar) dokuların yeniden düzenlenmesi, pıhtılaşması, matriks yapımı ve yıkımı gibi fizyolojik olaylarda rol aldığı gibi kanser, kas-iskelet sistemi hastalıkları, enflamasyon, fibrozis gibi patolojik olaylarda da yer alır. ADAMTS ailesine ait 19 üye tanımlanmış ve birçok özelliğine göre gruplandırılmıştır. Bu gruplardan ADAMTS2, 3 ve 14 kollajen ADAMTS’leri oluşturur ve kollajen işlenmesinde görev alır. Kollajen ADAMTS’lerden ADAMTS2’nin önemli özelliklerinden biri kollajenlerin amino uçlarının kesilip uzaklaştırılmasında görev alması diğeri ise anti-anjiyogenik aktiviteye sahip olmasıdır. Yüksek lisans tezi kapsamında ADAMTS2’nin farklı hücre hatlarında ekspresyon profili ve hipoksik koşullardaki ifadesi incelenmiştir. Ayrıca genin klonlanması ve ektopik olarak Saos-2 (insan kemik karsinomu) hücre hattında ifadesi gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla rekombinant ADAMTS2’nin Saos-2 hücrelerine kalsiyum-fosfat presipitasyonu ile geçici transfeksiyonu gerçekleştirildi ve transfeksiyon sonucu ADAMTS2’nin ifadesinde kontrol grubuna kıyasla 50 kat artış olduğu gözlendi.

ADAMTS (A Disintegrin and Metalloproteinase with Trombospondin Motifs) is involved in pathological events such as cancer, fibrosis, musculoskeletal disorders, inflamation as well as physiological events such as tissue reorganization, clotting, matrix building and destruction. 19 members of the ADAMTS family have been identified and grouped according to many characteristics. From these groups, ADAMTS2, 3 and 14 form collagen ADAMTS and serve in collagen processing. One of the important features of ADAMTS2 from collagen ADAMTS is that the amino ends of the collagen are excised and the other is anti-angiogenic activity. In the master thesis, the expression profile of ADAMTS2 in different cell lines and the expression in hypoxic conditions were examined. Also ADAMTS2 gene is cloned in eucaryotic expression vector and ectopically expressed in the Saos-2 (human bone carcinoma) cell line. For this purpose, recombinant ADAMTS2 was transiently transfected with calcium-phosphate precipitation into Saos-2 cells. There was a 50-fold increase of ADAMTS2 mRNA expression compared to the control group.