Sideritis perfoliata L. subsp. athoa (Papan. & Kokkini) Baden'den elde edilen polifenoloksidazın kısmi biyokimyasal özelliklerinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, dağçayından (Sideritis perfoliata L. subsp. athoa (Papan. & Kokkini) Baden) polifenol oksidaz (PFO) enzimi amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz işlemleriyle kısmen saflaştırılmış ve biyokimyasal olarak karakterize edilmiştir. Dağçayı PFO'sunun substrat spesifikliği, optimum pH, optimum sıcaklık, inhibisyon tipleri ve I50 değerleri belirlenmiştir. Enzimin 4-metilkatekol, katekol ve pirogallol substratlarına karşı aktivite gösterdiği bulunmuştur. Enzimin katalizleme gücünü gösteren Vmax/KM değerlerine göre en iyi substratın 4-metilkatekol olduğu ve bunu katekol ve pirogallolun takip ettiği belirlenmiştir. Optimum pH, 4-metilkatekol, katekol ve pirogallol substratları için sırasıyla 5.0, 7.0 ve 7.5 olarak bulunmuştur. Enzimin optimum sıcaklığı 4-metilkatekol, katekol için 20 ºC ve pirogallol için ise 50 ºC olarak tespit edilmiştir. Kısmi olarak saflaştırılan PFO aktivitesi üzerine askorbik asit, glutamik asit ve L-sistein gibi farklı inhibitörlerin etkileri 4-metilkatekol, katekol ve pirogallol substratları kullanılarak spektrofotometrik olarak araştırılmıştır. Substrat olarak 4-metilkatekol ve katekol kullanıldığında en etkin inhibitörün L-sistein, substrat olarak pirogallol kullanıldığında en etkin inhibitörün askorbik asit olduğu bulunmuştur. Bradford methodu kullanılarak elde edilen bulgular enzim ekstraktının 14,06 mg/100 g protein içeriğine sahip olduğunu göstermiştir.

In this study, a partial purified of polyphenol oxidase (PPO) obtained from sage (Sideritis perfoliata L. subsp. athoa (Papan. & Kokkini) Baden) was described that PPO is characterization through (NH4)2SO4 precipitation and dialysis. The samples obtained from (NH4)2SO4 precipitation and dialysis were used for the characterization of PPO. The characterization of PPO was studied in terms of substrate specificity, optimum pH and temperature. It was found that the enzyme had an activity with 4-methylcatechol, catechol, and pyrogallol substrates. Of these three substrates, 4-methylcatechol was the best substrate because of the highest Vmax/Km value, followed by catechol and pyrogallol. The optimum pH was at 5.0; 7.0 and 7.5 for 4-methylcatechol, catechol and pyrogallol substrates, respectively. The enzyme had an optimum temperature of 20, 20 and 50 0C for the 4-methylcatechol, catechol and pyrogallol substrates, respectively. The effect of different inhibitors such as ascorbic acid, glutamic acid and L-cysteine on partially purified polyphenol oxidase activity was investigated spectrophotometrically by using 4-methylcatechol, catechol and pyrogallol substrates. It was found the most effective inhibitor L-cystein using 4-methylcatechol and catechol, the most effective inhibitor ascorbic acid using pyrogallol. Protein amount of the enzyme extract was showed 14,06 mg/100g using by Bradford method.