Paraoksonaz enziminin glutaraldehit ile immobilizasyonu ve bazı ağır metallere karşı afinitesinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada, ilk olarak sığır serum PON1 enzimini saflaştırmak amacıyla Sepharose 4B L-tirozin 1-naftilamin kimyasal yapısındaki hidrofobik etkileşim kromatografi jeli kullanılmış ve PON1 enzimi saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ile serbest enzim için saflık kontrolü yapılmıştır. İkinci aşamada, enzim farklı glutaraldehit yüzdelerinde immobilize edilmiş ve enzim aktivitesi en fazla % 7 glutaraldehit oranında immobilize edilen enzimde gözlenmiştir. Dolayısıyla deneysel çalışmamızın bundan sonraki aşamalarında, % 7 glutaraldehit oranında immobilize edilen enzim dikkate alınmıştır. Buradan immobilize ve serbest enzim için enzim ünitesi ve substrat konsantrasyon değerleri hesaplanarak Km ve Vmax değerleri elde edilmiş ve serbest enzimin katalitik etkinliğinin immobilize enzime göre daha fazla olduğu gözlenmiştir. Son aşamada da Mn+2, Co+2, Cu+2 metallerinin (%7) immobilize ve serbest paraoksonaz enzimi üzerindeki inhibisyon etkileri çalışılmıştır. Cu+2 metalinin paraoksonaz enzim aktivitesi üzerindeki etkisine bakıldığında immobilize ve serbest enzimi inhibe ettiği gözlenirken, Mn+2 ve Co+2 metallerinin immobilize enzimi aktive ettiği, fakat serbest enzimi inhibe ettiği gözlenmiştir.

In this research, paraoxonase 1 (PON1) was purificated from serum blood by using sepharose 4B L-tirozin 1-naftylamin hydrofobic interaction chromotography gel and purification of the enzyme was controlled by sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Paraoxonase enzyme was immobilized at different ratios of glutaraldehyde and the maximum activity was observed at the ratio of % 7 immobilized enzyme. So this immobilized enzyme was investigated for other steps of our experiment. And for immobilized and free enzyme, enzyme units and substrate concentrations were calculated. Km and Vmax plots were determined and catalytic efficiency of free enzyme was bigger than immobilized enzyme. And finally, the effects of inhibition of Mn+2, Co+2, Cu+2 metals onto the immobilized and free enzyme activity were studied. When the effect of Cu+2 onto the immobilized and free enzyme were investigated, the inhibition of enzyme was observed. But on the other hand, the activation of immobilized enzyme was observed and inhibition of free enzyme was observed with Mn+2 and Co+2 metals.