Adamts14 Promotorunun Klonlanması ve Karakterizasyonu

Abstract

ADAMTS genlerinin, tümörlerin ortaya çıkması, gelişmesi ve metastazında önemli bir rol oynadığı ortaya konmuştur. Bu gen ailesinin üyelerinden biri olan ADAMTS14 geni kollajen içerikli ADAMTS grubunu oluşturmaktadır. ADAMTS14, 2002 yılında insan kromozomu 10q22.1'de bulunan ve ECM'nin birleştirilmesi ve bozulmasında önemli bir rol oynayan bir proteinazı kodlayan bir gen olarak keşfedilmiştir. ADAMTS14'ün anormal ekspresyonunun, hücre proliferasyonu ve metastazı dahil olmak üzere tümör hücresi davranışlarını etkilediğine dair çalışmalar bulunmaktadır. Bu yüksek lisans tezi kapsamında ADAMTS14’ün farklı hücre hatlarındaki ekspresyon ifadesi incelenmiştir. Ayrıca ADAMTS14 geninin promotor bölgesinden oluşturulan 5’ delesyon mutantlarının klonlanması ve doğrulanması gerçekleştirilmiştir. Doğrulanması için SW480 kolon kanser hücre hattında kalsiyum fosfat presipitasyonu ile geçici transfeksiyonu gerçekleştirilmiştir. ADAMTS14 gen ifadesi ile IL-6 arasındaki ilişkiyi incelemek için IL-6 sitokinin hücrelere farklı miktarlarda uygulanmış olup (20 ve 40ng), etkileri mRNA düzeyinde Real-Time PCR metoduyla belirlenmiştir. Bu sayede ADAMTS14 geni ve kolon kanseri üzerinde literatüre yeni bilgiler eklenmiştir.

ADAMTS genes have been shown to play an important role in the emergence, development and metastasis of tumors. ADAMTS14, one of the members of this gene family, forms collagen ADAMTS and is involved in collagen processing. ADAMTS14 was discovered in 2002 as a gene encoding a proteinase located on human chromosome 10q22. There are studies that aberrant expression of ADAMTS14 affects tumor cell behaviors, including cell proliferation and metastasis. With in the scope of this master thesis, the expression of ADAMTS14 in different cell lines was investigated. In addition, cloning and validation of 5' deletion mutants created from the promoter region of the ADAMTS14 gene were performed. For confirmation, transient transfection with calcium phosphate precipitation was performed in the SW480 colon cancer cell line. In order to examine the relationship between ADAMTS14 gene expression and IL-6, IL-6 cytokine was applied to the cells in different amounts (20 and 40ng), and its effects were determined at the mRNA level by Real- Time PCR method.