ß-galaktosidaz enziminin farklı bir yöntem ile saflaştırılması

Abstract

β-Galaktosidaz (β-D-galaktohidrolaz, EC 3.2.1.23 βGal), birçok oligosakkaritlerden, Dgalaktozil rezidülerinin hidrolizini katalizleyen bir enzimdir. βGal'ın, hidrolitik aktivitesi başta süt teknolojisi olmak üzere gıda endüstrisinde yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Ayrıca βGal, transgalaktozilasyon aktivitesi ile prebiyotik üretim proseslerinde uygulama alanı bulmuştur. Bu çalışmada, Aspergillus niger'den Sepharose 4B-L-tirozin-1-naftilamin kimyasal yapısına sahip hidrofobik etkileşim jeli kullanılarak β-Galaktosidaz, ilk defa saflaştırılmıştır. Bu amaçla söz konusu jel, ilgili yöntemlere göre sentezlenmiştir. Aspergillus niger'de üretilen β-Galaktosidaz, %90 Amonyum sülfat ile çöktürme işleminden sonra, direkt dengelenmiş hidrofobik etkileşim kolonuna yüklenmiştir. 1M (NH4)2SO4 içeren 0,1M Na2HPO4 (pH 8 ) ve 0,1 M Na2HPO4 (pH 8,0) elüsyon tamponu ile enzim, %53,8 verim ve 234,7 derece ile saflaştırılmıştır. Bu değerlerin literatür verileriyle karşılaştırıldığında yüksek olduğu görülmektedir. β-Galaktosidaz saflaştırılmasında kullanılan hidrofobik jel, uygun koşullarda muhafaza edilmesi ile uzun süre kullanılabilir olması elde edilen enzimin maliyetini önemli ölçüde düşürecektir. Söz konusu çalışmanın yerli enzim üretimi için farkındalık oluşturacağı ve çalışmadan elde edilecek sonuçların gerek temel bilimlerde gerekse gıda mühendisliği alanında yaygın etki göstereceği kanaatindeyiz.

β-Galactosidase (β-D-galactohydrolase, EC 3.2.1.23 βGal) is an enzyme that catalyzes the hydrolysis of D-galactosyl residues from many oligosaccharides. The hydrolytic activity of βGal is widely used in the food industry, especially in dairy technology. In addition, βGal has found application area in prebiotic production processes with its transgalactosylation activity. In this study, β-Galactosidase was purified for the first time using a hydrophobic interaction gel with the chemical structure of Sepharose 4B-L-tyrosine-1-naphthylamine from Aspergillus niger. For this purpose, the gel was synthesized according to the relevant methods. β-Galactosidase produced in Aspergillus niger was loaded directly into the equilibrated hydrophobic interaction column after precipitation with 90% Ammonium sulphate. The enzyme was purified with an elution buffer of 0,1M Na2HPO4 (pH 8) and 0,1 M Na2HPO4 (pH 8.0) containing 1M (NH4) 2SO4, and obtained with 53.8% yield and 234.7 degrees. It is seen that these values are higher than the data reported in the literature. The hydrophobic gel used in the purification of β-galactosidase will significantly reduce the cost of the obtained enzyme, as it has a longer shelf life when kept under suitable conditions. We believe that the study in question will raise awareness for domestic enzyme production and the results obtained from the study will have a widespread effect on both basic sciences and food engineering.